スピルリナからのフィコシアニンを抽出する方法
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スピルリナからのフィコシアニンを抽出する方法

数ブラウズ:0     著者:g g     公開された: 2021-10-25      起源:パワード

の抽出フィコシアニンスピルリナから

実験の原理

凍結解凍法:特定のために細胞を低温で凍結する 期間の期間、それからそれらを取り出して室温で解凍する。繰り返す 凍結と解凍は何度も、細胞は成形中に膨らんで壊れることがあります 氷粒子と残りのサイトゾル塩の濃度を高めます。

2.塩漬け方法:によって形成された正および負イオン 水溶液中の塩のイオン化は水分子を引き付けることができ、それによって タンパク質のスプラッシュフィルムを破壊し、電荷の中和部分、 タンパク質を凝集し沈殿させ、沈殿させてから沈殿させる 解決。様々なタンパク質粒子の大きさの違いにより、 特定の中性塩の場合の電荷量と親水性の程度 塩析に使用されているため、必要な最小塩濃度は異なります。

3. DEAE-セルロース:英語名DEAE-セルロース、ジエチルアミノエチル セルロース、総交換容量0.9Meq / G官能基:ジエチルアミノエチル。 弱い塩基性アニオン交換器。原則:特定の機能グループを含む これはイオン交換することができます。性能は一般的なイオンのそれよりも穏やかです 交換樹脂それは生物学的に活性の分離に適しています 高分子および類似の高分子物質を分離することができる プロパティ。


フィコシアニン抽出

Spirulina Platensis witバイオマスからのC-フィコシアニン抽出

実験ステップ

1.フィコシアニンの抽出

10gのスピルリナパウダーを服用し、それをペットボトルに注ぎ、100mlを加えてください ボトルの口を抽出し、密封し、低温(-20℃)で凍結します。 一定期間、それからそれを取り出して室温で溶かして それからそれを低温(-20℃)に置き、そのような凍結および解凍を繰り返した 氷粒子を形成しながら3回、細胞が膨張し、破ることができると 残りcytosaltの濃度を増加させます。実験的な現象: 固体(少し紫)解凍後ダークグリーン:解凍前の溶液 濃い緑色の溶液を二回遠心分離し、凍結融解によって得られました 4000 rpmで10分間であった明るい青色の上清を入手します 小さなビーカーに集め、廃棄下層は暗緑色であります 降水量。


大規模な使用のためのフィコシアニン抽出処理

塩析法によるフィコシアニンの降水量

1.フィコシアニン塩析曲線の製造

1~6の番号を付けた6つのテストチューブを取り、5mlの最初の抽出物を追加します それぞれ飽和硫酸アンモニウム溶液を添加する(69.7gの硫酸アンモニウムを 100ml溶液)2,3,4,5ml試験管1~4内で、次に蒸留水を加える 3. 2,1、0ml、0.66および1.37gの固体硫酸アンモニウムを試験管5~6に加える。 次に5mlの飽和硫酸アンモニウム溶液を加え、溶解するためによく振る。 冷蔵庫の30分以上、遠心分離に入れる 4000rpm、沈殿物を集め、沈殿物を5mlと溶解する。 0.02mol / L pH6.5リン酸緩衝液。のように硫酸アンモニウムの飽和を取ります 縦座標としての横座標とピコビリタンパク質濃度 フィコシアニン塩析曲線


C =(A620-0.474A650)/5.34(mg / ml)


A620およびA650はそれぞれ620nmおよび650nmの吸光度で調整された リン酸緩衝液でゼロにする。


フィコビリタンパク質精製

  1. 計量(NH 4)2 SO 4固体粉末、ゆっくりそれをいくつかの小さなビーカーに追加します (NH 4)2 SO 4の溶液飽和度を添加しながら撹拌しながらかき混ぜる 20%(11.4%)。 30分の間冷蔵庫に入れ、4000で遠心分します 遠心沈降後、10分間のRPM、鮮やかな青を入手 上清、抽出物を捨てる。硫酸アンモニウムを加えてください (NH 4)溶液の2SO 4濃度は50%(31.3%、量を差し引く 硫酸アンモニウムは以前に添加した。遠心分離し、高い沈降後 4000rpmで10分間のスピード、暗い青色の沈殿物が得られ、 黄緑色の上清が捨てられます。 15ml以下の蒸留水を加えないでください 得られた沈殿物を後で使用するために溶解するため(水の量は できるだけ少ない、それは透析に資する。


2.透析袋を25cmの長さ約25cm、ビーカーに入れて5の間沸騰させる 分(水が沸騰している時からの時間)、片端を薄く結びます スレッド、半分に折りたたんで、薄い糸とそれを結びます。以前に注ぐ 溶解して沈殿した溶液をクロマトグラフィーバッグに入れる。それを入れる 蒸留水と透析液を1時間に変更します。透析後、入ります 濃度のためのPEG-6000固体粒子。


3.クロマトグラフィーカラムを取り、リーク検出後に清掃して修正してください。 2つの鉄クランプで鉄のスタンドに。それが垂直であるかどうかを確認してください 前面と側面で、垂直ではない場合は調整してください。体重20g 0.5M NaClおよび0.5MのNaOH溶液を有するビーカー中のDEAE-セルロース52 20分後、中性になるまで蒸留水で洗浄します。それから使います 0.5MHCl溶液を20分間膨潤させ、次いで蒸留水で洗浄する 中立的まで。最後に、0.02M、pH6.5リン酸緩衝液で平衡化する 一晩。溶液を穏やかに攪拌し、それを均一にカラムに注ぎます。三 列の液面に2~3cmのスペースであるべきです。 液体表面が元のスケール位置まで下がります、水は 蒸留水が常にもっと多くの高さに追加されます。 フィラーより2cm高い。


4.調製したクロマトグラフィーカラムのバッファーを放してオフにします 液体レベルが約1cm高いときのカラムスイッチ フィラー。透析粗フィシコシアニン抽出物を吸い込むためにゴムチップスロッパーを使用してください。 それを列の液面に延ばし、粗抽出物を降りてください。 液体表面の真ん中に非常に遅い速度での管の壁、 液面が上昇した後に滴下を加速します。加速度。のとき 液面は柱口から約2cmのほんの2cm、スイッチの電源を入れます 完全に粗抽出物を引き寄せ続ける。


粗抽出物の液体レベルが約1cm高いほど約1cm高いとき 充填剤、50ml、0.02M、pH6.5リン酸緩衝液を滴下する 残りの粗抽出物。一度に追加しないでくださいが、まず小さなものを追加します 残りの粗抽出物を洗浄する量(解が透明になるまで) そして大量を追加します。最後に、0.5M NaCl-0.02M、pH6.5リン酸を加える バッファ。


6.慎重に観察してください。水色の溶液が流出するときは、始めます すぐに集める、2mlのチューブ(合計10本のチューブを集める)。後に 試験管が集められ、試験管内の溶液の色が変わる。 光→暗→ライトブランクコントロールとしてリン酸緩衝液を撮る チューブ、そして分光光度計を使用してA620nmとA650nmを測定します。


7. A620NMに基づいて各チューブのフィコシアニン濃度を計算します。 A650nm。

測定:溶液の各チューブの濃度または活性 集められたら決定されます。測定結果によると、 溶出曲線を描くことができます(チューブ番号または溶出量を 横座標、および溶液サンプルの各チューブの濃度 縦座標)